抗生素對大家來(lái)說(shuō)并不陌生?？股刈鳛橐环N消炎藥，廣泛應用于各種疾病的治療中，但濫用其危害也是顯而易見(jiàn)的；近年來(lái)，除了歐美國家在地表水中發(fā)現抗生素超標外，我國一些科研人員在長(cháng)江的抽樣檢測中也發(fā)現了抗生素含量高的現象。這些抗生素大多由醫療廢水、生活污水、水產(chǎn)養殖廢水、動(dòng)物用藥、飼料等排放到地表水中，然后部分通過(guò)飲用水進(jìn)入人體。這也是近年來(lái)出臺多項水中抗生素檢測標準的原因。

今天就來(lái)說(shuō)說(shuō)液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜檢測水中抗生素的方法。該方法的檢測原理是將收集到的水質(zhì)樣品經(jīng)0.22pm濾膜過(guò)濾，與乙腈1:1混合，用液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀測定。根據保留時(shí)間和特征離子定性，外標法定量。

一、檢測所用試劑：

1.乙腈：色譜純。

2.甲酸：色譜純。

4.50%乙腈溶液：取50ml乙腈，用水稀釋至100ml。

5.0.1%甲酸水溶液：取lml甲酸，用水稀釋至1000ml。

6.標準品：紅霉素，含量≥97.0%；青霉素，含量≥98.0%。

7.紅霉素標準儲備液濃度為100ug/ml。準確稱(chēng)10.0mg紅霉素標準產(chǎn)品，用乙腈溶解稀釋成濃度為100ug/ml的標準儲備液；也可以直接購買(mǎi)有證標準溶液，在-10℃以下冷凍，避光保存；或者參照廠(chǎng)家的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)保存，使用時(shí)應恢復室溫，搖勻。

8.青霉素標準儲備液濃度為100ug/ml。準確稱(chēng)10.0mg青霉素標準產(chǎn)品，用50%乙腈溶液溶解稀釋成濃度為100ug/ml的標準儲備液；也可以直接購買(mǎi)有證標準溶液，在-10℃以下冷凍，避光保存；或者參照廠(chǎng)家的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)保存，使用時(shí)應恢復室溫，搖勻。

9.紅霉素和青霉素混合標準使用液:濃度為10.0ug/ml。紅霉素和青霉素標準儲備液分別在10.0ml容量瓶中取1.00ml，用50%乙腈溶液定容，可獲得紅霉素和青霉素混合標準使用液。

10.濾膜：一次性針式過(guò)濾器，0.22um，混合纖維素酯(MCE)材料。

11.一次性聚丙烯針管。

二、檢測所用儀器：

1.液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)，具有梯度洗脫和多反應監測功能。

2.分析天平：感量為0.0001g。

3.樣品瓶：100毫升磨口或帶聚四氟乙烯內襯瓶蓋的棕色玻璃瓶。

4.微量注射器或移液器：10ul、50ul、100ul、500ul、1.0ml。

三、采集和制備水樣:

我們可以按照有關(guān)規定收集水質(zhì)樣品。采集水樣時(shí)，應充滿(mǎn)樣品瓶，無(wú)縫隙。冷藏在4℃以下，避光保存。2d內完成分析。

四、水樣的制備:

水樣應充分混合，取約10ml樣品，用0.22um濾膜過(guò)濾。放棄至少1ml的初始濾液后，準確將500ul過(guò)濾后的樣品從棕色進(jìn)樣瓶中取出，然后加入500ul乙腈，待測試。

制備空白水樣。用實(shí)驗室一級純水代替水樣，然后按照水樣制備步驟操作空白水樣。

五、檢測步驟：

1.液相色譜條件：

色譜柱為C18(100mmX2.1mm，粒徑1.7um)，或相等；流動(dòng)相為A:乙腈，B:0.1%甲酸水溶液；流速為0.25ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積為10ul；流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.質(zhì)譜條件：

離子源為電噴霧離子源(ESI)；掃描方法為正離子模式；監測方法為多反應監測(MRM)；去溶劑氣、錐孔氣、碰撞氣均為高純氮氣或其他合適氣體。

3.建立標準曲線(xiàn)：

取適量紅霉素和青霉素混合標準用液，用50%乙腈溶液稀釋?zhuān)苽渲辽?個(gè)濃度點(diǎn)的標準系列溶液。標準溶液中紅霉素和青霉素的參考濃度分別為0.100ug/L、0.200ug/L、0.500ug/L、1.00ug/L、2.00ug/L、5.00ug/L、10.0ug/L和20.0ug/L。根據規定的儀器條件，從低濃度到高濃度依次測量標準系列溶液。以目標化合物的質(zhì)量濃(ug/L)為橫坐標，以相應的響應值為縱坐標，建立標準曲線(xiàn)。

六、水樣的測定：

按規定的儀器條件測量準備好的水樣。定性分析可以在相同的色譜/質(zhì)譜條件下測量標準溶液和樣品。根據標準溶液色譜圖的保留時(shí)間和樣品的保留時(shí)間，標準溶液各色譜峰的特征離子與樣品各色譜峰的特征離子相對定性。樣品與標準物質(zhì)保留時(shí)間的相對偏差不大于5%。樣品中目標化合物定性子離子的相對豐度(Ksam)。與濃度相近的標準溶液中相應定性離子的相對豐度(Kskd)相比，相對豐度偏差不超過(guò)相關(guān)圖表規定的范圍，可以判斷樣品中存在相應的目標化合物。水樣中紅霉素、青霉素的質(zhì)量濃度可直接按公式計算。